后修饰组学

技术概述
       磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一,与信号转导、细胞周期、生长发育以及癌症机理等诸多生物学问题密切相关。鉴定蛋白质磷酸化位点有助于阐明蛋白质磷酸化的机制与生物学功能。目前,质谱是进行蛋白质磷酸化分析最有力的方法之一。
技术原理
       蛋白样品中,发生磷酸化的蛋白质和肽段含量极低,且存在各种非磷酸化肽段和无机盐的干扰,致使检测磷酸化蛋白和磷肽段非常困难。

     TiO2是最常用、发展最成熟的富集磷酸化蛋白/肽段的一种方法。在酸性条件下,TiO2表面带正电,可以与磷酸化肽发生静电作用而达到吸附的目的。样品经酶解后,用TiO2微球对磷酸化肽段进行富集,富集后的产物由高精度质谱分析,并通过专业软件完成数据检索。

     另外,TiO2富集结合itraq标记,二甲基标记等蛋白质定量方法,还可以进行定量磷酸化蛋白质组分析
。       
技术优势
       TiO2富集效率高达95%,可提高修饰肽段检测效率;

       基于高精度的质谱分析,精确鉴定修饰位点;
实验流程
蛋白磷酸化后修饰流程
蛋白磷酸化
应用领域
       疾病机理研究;       个性化医疗;         农业品种改良
样品要求
       蛋白质提取物:浓度 >1μg/μl,蛋白质总量 >600μg;

       细胞样品:细胞量>107;

       组织样品:动物、微生物组织湿重>20mg
       植物鲜嫩组织>200mg;

       体液样品:血液体积>1ml


      蛋白质组学
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